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                熱門詞:生物顯微鏡 水質分析儀 微波消解 熒光定量PCR 電化學工作站 生物安全柜

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                納米抗體技術發現服務
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                • 納米抗體技術發現服務

                納米抗體技術發現服務

                產品報價:詢價

                更新時間:2023/8/22 14:17:26

                地:天津

                牌:泰克生物

                號:服務

                廠商性質: 服務型,

                公司名稱: 泰克生物科技(天津)有限公司

                產品關鍵詞: VHH納米抗體庫構建   納米抗體制備   納米抗體發現  

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                江志華 : (18920585432) (0400-1688285)

                (聯系我時,請說明是在來寶網上看到的,謝謝?。?/b>


                泰克生物著力于為客戶提供高質量,且具性價比的抗體藥物前期發現技術服務。我們在藥物抗體發現方面擁有10年的項目開發經驗和心得,積累了充足的抗體定制和重組蛋白生產經驗?;谑删w展示技術(Phage Display Technology)平臺的服務,泰克生物能夠為客戶提供一系列包括但不限于兔源、鼠源、羊源、駝源及牛源等不同物種的單克隆抗體制備服務,及其配套的完整可追溯性文件系統。

                噬菌體展示技術(即:納米抗體技術)是將外源蛋白或多肽的DNA序列插入到噬菌體外殼蛋白結構基因的適當位置,通常為M13噬菌體的P3蛋白,使外源基因隨外殼蛋白的表達而展示到噬菌體表面的生物技術。噬菌體展示的特點在于其展示納米抗體文庫中變異抗體基因的多樣性,各個重組噬菌體(常用噬菌體為M13噬菌體)表面展示出不同的抗原結合域,相較于傳統雜交瘤方法,噬菌體展示技術在抗體基因展示與篩選層面則具有非常突出的效率(如雜交瘤融合效率一般<0.4%,即1000次融合細胞中,大概4個融合子;而噬菌體展示可以獲得108-109個正確抗體序列)。


                █ 噬菌體展示抗體文庫構建服務

                 

                泰克生物可為客戶提供駝源VHH納米抗體庫,scFv抗體庫,Fab抗體文庫構建以及篩選服務。其中VHH納米抗體庫,又稱為駝源重鏈抗體文庫,抗體分子量大小為15kDa,是駝源動物產生的特有的一種抗體。被應用于CarT/Car-NK治療性的駝源VHH抗體(又被稱為納米抗體)噬菌體展示發現路徑如圖1所示:

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                1基于噬菌體技術平臺的駝源VHH抗體發現服務



                泰克生物還可以提供一系列的抗體驗證服務,例如:通過GST pull-down或CO-IP策略檢測展示的蛋白質與其他分子之間的相互作用或分離特定目標、抗原抗體BLI親和力測定、細胞功能驗證及細胞系體外驗證等。

                泰克生物提供的納米抗體庫具有豐富的多樣性和規模,是篩選所有抗原類型以及選擇具有高親和力的功能性抗體的理想選擇。憑借多年的經驗,我們開發了多種噬菌體平臺,可以為您定制特定的納米抗體文庫。如果您有興趣開展噬菌體展示抗體項目,或者其他相關服務,例如抗體測序、scFv、Fab和Fc 融合蛋白等,請聯系我們!


                █ 服務內容和周期

                 


                步驟

                服務內容

                QC標準

                周期

                Step1:蛋白表達

                (1) 密碼子優化+基因模板合成+表達載體構建;

                (2) 質粒抽提+轉染(哺乳表達系統)目的蛋白檢測(WB,SDS-PAGE);

                (3) 蛋白表達放大+蛋白親和純化;

                交付:表達載體,克隆甘油菌,重組蛋白3-3.5mg,純度>85%,標準實驗報告

                 

                4-6周

                Step2:動物免疫

                (1) 動物免疫4次,加強免疫一針,共計免疫5針;

                (2) 免疫前采集陰性血清,第4針采血進行ELISA檢測血清效價;

                (3) 若第4針血清抗體效價(蛋白抗原>105;多肽抗原>104)滿足要求,則采血前7天再次加強免疫1針,如不滿足要求,則繼續常規免疫;

                (4) 效價合格,采血分離單核細胞;

                動物:背景清晰(年齡,性別,防疫情況);

                免疫:蛋白抗原>105;多肽抗原>104;

                采血:數量100ml以上;

                PBMC細胞:>105/vial

                 

                8-10周

                Step3:模板cDNA制備

                (1) PBMC總RNA提?。≧NA提取試劑盒)

                (2) 高保真RT-PCR制備cDNA(反轉錄試劑盒)

                cDNA:反轉后>1ug/ul,膠圖分布均勻;

                cDNA模板總量>150ug;

                1 天

                Step4:噬菌體展示文庫構建

                (1) 以cDNA為模板,兩輪PCR法擴增VHH基因;

                (2) 噬粒構建與轉化: VHH基因拼接噬菌粒載體,電擊轉化TG1宿主菌,構建抗體庫,混合建庫電擊次數不低于30次(單靶點建庫,電擊次數不低于15次);

                (3) 鑒定:隨機挑選24個克隆,PCR鑒定陽性率+插入率

                (4) 輔助噬菌體準備:M13噬菌體擴增+純化;

                (5) VHH展示文庫救援

                文庫陽性率:>90%;

                文庫插入性率:>90%;

                庫容:>108

                1-2周

                Step5:文庫篩選(3輪篩選)(固相篩選)

                (1) 抗原包被(單個蛋白篩選,常規默認是固相篩選法或磁珠分選;細胞篩選方法需要單獨核算費用);

                (2) 默認3輪篩選:壓力篩選,較大限度去除非特異性抗體;

                (3) 挑取96個克隆擴增噬菌體+IPTG誘導表達+ELISA檢測陽性克??;

                (4) 挑取全部陽性克隆進行基因測序(>20個,多達96個);

                ELISA陽性標準:P/N>3;

                VHH篩選標準:CDR氨基酸序列不同

                2-3周

                Step6:抗體驗證(體外驗證)

                (1) 將獲得的抗體序列構建合適的表達載體進行表達+親和純化+抗體蛋白定量;

                (2) Elisa驗證抗體與抗原結合,進行下游驗證(交付EC50數據);

                (3) BLI法驗證抗體親和力;

                (4) 細胞功能驗證:流式驗證;

                (5) 驗證細胞系(抗原受體過表達細胞系);

                交付:表達載體,克隆菌株,表達菌株,重組抗體蛋白1mg,純度90%;

                快速親和力測定結果;

                4-6周



                █ 服務亮點

                 

                -- 物種適應性較多:人,鼠,兔,羊,羊駝,駱駝,魚等物種的單抗開發均兼容(不適用牛源單抗開發)

                -- 技術平臺成熟:噬菌體展示技術提供1級免疫文庫的建庫庫容為108-109,插入率均滿足>95%,篩選獲得的抗體親和力普遍處于nM- pM級別

                -- 開發周期短:獲得PBMC后,建庫到篩選獲得抗體序列,3-4周

                -- 產品交付標準高:針對免疫庫,交付免疫前后血清,抗體展示文庫,篩選洗脫產物,抗體序列

                -- 文庫淘篩定制化(噬菌體展示方式):根據客戶需求不同以及靶點性質不同,會設計不同的篩選方法,如固相,固相/液相和細胞篩選

                -- 實驗記錄可追溯:QC質控標準(含RNA提取,cDNA制備等),中英文實驗報告,手寫實驗記錄本 


                泰克生物科技(天津)有限公司

                | 第2

                手機:18920585432

                聯系人:江志華

                電話:0400-1688285

                傳真:0400-1688285

                QQ:2711550972

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